第二届国际传统与现代生殖医学大会论文集

国际传统与现代生殖医学

第二次国际学术研讨会会议论文集前言

主办单位：国际传统与现代生殖医学协会

                中国成都中医药大学/成都中医药大学附属医院

                中国成都中医药大学第二附属医院

                意大利罗马大学医学院

                全欧洲中医药专家联合会

协办单位：意大利中华医药学会

                 中国温州中山医院/中国中西医结合学会生殖医学不孕

                 不育研究所

                 法国巴黎第十三大学达芬奇医学院

                 新加坡中医药促进会

                 荷兰欧洲中华医药研究发展中心

                 中国浙江省中西医结合学会生殖医学专业委员会

                 中国四川省中西医结合学会妇产科专业委员会

支持单位：意大利教育部

                 意大利卫生部

                 中国驻意大利大使馆文化处

                 世界中医药学会联合会

                 世界针灸联合会

会议主席团

会议主席

程    泾   中国温州中山医院、中国中西医结合学会生殖医学不孕不育研究所院（所）长，教授

萨·巴巴罗   意大利罗马大学医学院结合医学部主任，教授

会议执行主席

何 嘉 琅    世界中医药学会联合会主席团执行委员，教授

陆  华    中国成都中医药大学第二临床医学院/第二附属医院院长，教授

会议特别顾问

刘 敏 如    中国成都中医药大学，教授

吴 锡 春    新加坡中医药促进会，教授

朱 勉 生    法国巴黎大学达·芬奇医学院中医部主任，教授

陈 菁 华    英国牛津大学研究员，皇家医学院终身院士，教授

马 伯 英    全英中医药联合会主席，英国皇家医学会终身院士，教授

江 杨 清    全欧洲中医药专家联合会轮执主席，教授

Massimo Moscarini      意大利罗马大学医学院妇产科主任，教授

Donatella Caserta      意大利罗马大学医学院妇产科，教授

Fernando Mazzilli      意大利罗马大学医学院内分泌科，教授

Antonio Aceti        意大利罗马大学医学院感染科主任，教授

Raffaele Amello       意大利罗马大学医学院内科，教授

Maria Rosaria Torrisi    意大利罗马大学医学分子和临床医学部主任，教授

Vincenzo Saraceni      意大利罗马大学医学院物理医疗部主任，教授

Aldo Liguori        世界针灸联合会副主席，教授

Antonio Parisi         意大利卫生部职业卫生资源司主任，博士

Massimo Roia          世界中医药联合会监理会副主席，博士

学术委员会主任

罗 颂 平    中国广州中医药大学第一附属医院妇科主任，教授

学术委员会副主任

谭 万 信      中国成都中医药大学，香港东华三院，教授

许   晋     英国牛津大学医学研究院生殖医学中心针灸主任，博士

杜 惠 兰      中国河北医科大学中西医结合学院院长，教授

韩 延 华      中国黑龙江中医药大学附属第一医院妇科，主任医师

胡 国 华     中国上海市中医医院副院长，主任医师

刘 瑞 芬     中国山东中医药大学附属医院妇科，主任医师

徐  键     浙江大学医学院附属妇产科医院副院长，主任医师

许 丽 绵     中国广州中医药大学第一附属医院妇科副主任，主任医师

夏 雅 仙     中国浙江大学医学院附属第一医院妇产科主任，主任医师

丁 丽 仙     中国贵阳中医学院附属医院妇科主任，主任医师

张 婷 婷     中国上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院妇科主任，教授

吴 克 明     中国成都中医药大学临床医学院妇科，教授

丛 慧 芳     中国黑龙江中医药大学附属第一医院妇科主任，主任医师

傅  萍     中国浙江杭州市中医院中医妇科主任，主任医师

王 东 梅     中国山东中医药大学附属医院妇科主任，主任医师

刘 小 章     中国四川省计划生育科研所所长，教授

徐 元诚     中国南京金陵男科医院院长，主任医师

会议秘书长

林  斌     荷兰欧洲中华医药研究发展中心，教授

会议副秘书长

李  鋐     意大利中华医药学会秘书长，医师

国际传统与现代生殖医学协会主席致欢迎辞

尊敬的罗马大学校长费拉蒂教授，尊敬的罗马大学医学院院长维钦佐·兹巴罗教授，尊敬的意大利共和国总统顾问迪托·利佐博士，尊敬的中华人民共和国驻意大利大使馆文化参赞郑浩先生，尊敬的成都中医药大学校长范昕建教授、刘敏如教授，各位领导、特别顾问、专家、代表们：

早上好！

世界有句名言叫做“条条道路通罗马”，在这风光秀丽的旅游季节，国际传统与现代生殖医学第二次国际学术研讨会，在有小牛生长乐园美誉的意大利首都、世界著名古城罗马胜利开幕了。在此，我代表国际传统与现代生殖医学协会及共同主席林斌教授，向这次会议的主办方中国成都中医药大学、成都中医药大学附属医院、中国成都中医药大学第二临床医学院/第二附属医院、意大利罗马大学医学院、全欧洲中医药专家联合会，以及协办方中国温州中山医院、中国中西医结合学会生殖医学不孕不育研究所、中国四川省中西医结合学会妇科专业委员会、中国浙江省中西医结合学会生殖专业委员会、法国巴黎第十三大学达芬奇医学院、荷兰欧洲中华医药研究发展中心、新加坡中医药促进会、意大利中华医药学会表示衷心的感谢，还要感谢这次会议共同主席意大利罗马大学医学院结合医学部主任萨·巴巴罗教授，感谢国家教育部重点学科及国家中医药管理局重点学科成都中医药大学中医妇科学科对本次大会的资助，感谢会议执行主席何嘉琅教授、陆华教授对本次会议筹备及召开作出的卓越贡献，以及莅临本次会议的各位领导、专家和学者们，对诸位的光临表示最诚挚的欢迎。

 生殖医学是人类生存延续的永恒主题，生殖医学尤其是不孕不育问题，是一个影响人类发展与健康的全球性的医学问题。据WTO报告，世界已婚夫妇不孕不育的发生率平均在8～10%，随着环境污染的日益严重，生活方式的改变、化学药物的滥用等原因，不孕不育的发病率正在大幅提升，不久前WTO把不孕不育与心血管病、肿瘤并列于当今最有危害性的三大主要疾病。传统医学和现代医学是两门在不同的历史条件下形成的医学科学理论体系，对人类生殖健康各自作出了巨大的贡献，面对生殖医学的盲点、难点和亮点，为促进传统与现代生殖医学的结合和发展，不断探索和创建中西医结合诊疗生殖疾病的新模式和新流派，为积极推动国际生殖医学的进步和繁荣，我们将定期组织和邀请传统和现代生殖医学专家们进行交流沟通、探讨总结、联手合作，以为人类的生殖健康作出贡献。

在此，我预祝大会圆满成功，并祝诸位女士、先生们与会期间生活愉快，万事顺心，身体健康。

谢谢各位。

程　泾

2012年7月18日

目  录

益肾导痰调冲汤对多囊卵巢综合征大鼠瘦素及其受体和胰岛素样生长因子I受体表达的影响 程  泾

欧洲生殖领域的中西医互动 何嘉琅

多囊卵巢综合征中医论治体会 刘敏如

中西医结合治疗多囊卵巢综合症(PCOS)引起不孕治疗的体会 吴锡春

时空针灸在逐月养胎中的应用 朱勉生

中医辨证论治不孕症的特色和研究方向 马伯英

寿胎丸与菟丝子有效部位补肾安胎的药效学研究 罗颂平

“益胃汤”补益阳明津气调整卵巢机能的实验研究及应用 谭万信

补肾法、疏肝法对促性腺激素预处理小鼠排卵过程ADAMTS-1、组织蛋白酶-L mRNA及其蛋白影响的比较研究 杜惠兰

益肾调肝法联合克罗米芬对多囊卵巢综合征促排卵的临床研究 韩延华

病症结合，圆机活法——中医治疗不孕症琐谈 胡国华

补、调、温、通四法辨治排卵障碍性不孕症临证思路探析 刘瑞芬

沙眼衣原体感染抗精子免疫大鼠模型的免疫功能变化及中药干预的研究 梁菲梅

“宫寒”的探讨及宫寒理论在不孕症的应用 丁丽仙

从《内经》体质观认识并指导不孕症的临床研究 张婷婷

运用“治未病”思想分期诊治卵巢早衰 吴克明

血清雌二醇与早期先兆流产中医证型及预后的关系 傅  萍

中西医结合治疗PCOS对IL-6、TNF-α影响的临床研究 王东梅

音乐调理辅助治疗心因性不孕症的临床观察 李学君

妇产科围手术后期中医证候分布规律研究 谢  萍

国医大师何任活血化瘀治疗不孕不育经验探析 何若苹

全球和我国男性节育方法的应用状况 刘小章

补肾调周法用于体外授精-胚胎移植的临床研究 孙永忠

传统中医和气功在医疗不孕证的实践 吴荣贵

我国病残儿医学管理和服务现况 王  珍

中西医综合疗法对复发性流产患者血清VEGF、sFlt-1的影响 李伟莉 

寄生助孕冲剂对胚泡着床障碍小鼠HOXA10基因表达的影响 刘  丽

寄生助孕冲剂对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜降钙素表达的影响 孙一鸣

TLR2和TLR4在慢性炎症输卵管组织的表达及其意义探讨 张红霞

The Effects of Chinese Medicines for Tonifying The Kidney on DNMT1 Protein Expression in Endometrium of Infertile Women during Implantation Period

益肾导痰调冲汤对多囊卵巢综合征大鼠瘦素及其受体和

胰岛素样生长因子I受体表达的影响

程 泾 卢莉莉 浙江省温州中山医院中西医结合生殖中心  温州325014

程蕾 黄鹏 浙江省温州市鹿城中山医药保健研究所

摘 要  

       目的：观察益肾导痰调冲汤对多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠瘦素及其受体和胰岛素样生长因子I受体表达的影响。方法：70只SD大鼠，采用“T＋HCG”造模法制作PCOS大鼠模型。造模后将大鼠随机分为正常对照组、空白模型组、益肾导痰调冲汤等效剂量组（以下简称中药组）、西药达英－35组、达英加中药组、桂枝茯苓丸组各10只。观察卵巢组织形态学改变；放射免疫法测定血清内分泌的改变；ELISA法测定瘦素（Lep）；免疫组化法测定卵巢组织瘦素受体（OB-R）及胰岛素样生长因子I受体（IGF-IR）表达。结果：益肾导痰调冲汤可改善PCOS大鼠卵巢组织结构，缩小卵巢体积，减少囊状卵泡及闭锁卵泡数目。降低LH、LH/FSH、T、Lep，增高E2水平，降低OB-R、IGF-IR阳性表达。结论：益肾导痰调冲汤可改善PCOS大鼠lep与OB-R的结合障碍，调节OB-R、IGF-IR的生物利用度，从而改善PCOS大鼠的高雄激素血症及排卵障碍。

关键词  

      PCOS  大鼠  瘦素  瘦素受体  胰岛素样生长因子受体  益肾导痰调冲汤  

[ABSTRACT] Objective Aim of the study is to observe the effect of Yishendaotantiaochong（YSDTTCD）to Rats leptin and its receptor and insulin-like growth factor receptor expression I. Methods Rat models with Polycystic Ovary Syndrome（PCOS） were established by hypodermic injection with T and HCG .Rats were randomly divided into six groups. Normal matched control, model matched control, group that treated with the YSDTTCD, group that treated with the pill of Diane-35, group that treated with the YSDTTCD and Diane-35, group that treated with the pill of Guizhifuling. The ovaries were isolated from the rats and the histomorphological changes of them were observed. The change of internal secretion in blood was determined by radio-immunity. Leptin in blood was determined by ELISA.OB-R and IGF-IR in the tissues of ovaries was analysised with immunohistochemistry technique. Results YSDTTCD could decrease

基金项目：浙江省温州市卫生科技发展计划（No.S08177）；温州市鹿城区科技计划项目（S0070111）

通讯作者：程泾：Tel：13017889992；E-mail：zsyy007@163.com

the ovarian volume and the number of vesicular follicle and atretic follicle in ovarian tissue, decrease the LH、LH/FSH、T and leptin levels and increase the E2 level of the blood significantly, while leptin  receptor (OB-R) and Insulin-like growth factor-I receptor (IGF-IR) were found mainly in theca cells and granular cell in ovaries . Conclusion The study showed that YSDTTCD could improve the hyperandrogenism and anovulation of PCOS of rat model by improving the combinative obstacle between leptin and leptin receptor, while regulating the biological availability of OB-R and IGF-IR in ovaries.

[Key Words]YSDTTCD, PCOS of Rat Model, leptin, OB-R, IGF-IR

多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是以长期无排卵及高雄激素为特征的内分泌综合征，也是生育期妇女月经失调和无排卵不孕患者最常见的原因[1]。近年来，瘦素（Lep）、瘦素受体（OB-R）及胰岛素样生长因子I受体（IGF-IR）在PCOS发生发展中的作用已逐渐受到重视。益肾导痰调冲汤是程泾教授的经验方，本实验观察该方对多囊卵巢综合征大鼠瘦素及其受体和胰岛素样生长因子I受体表达的影响。

一、实验材料

1.1  动 物  

SPF级雌性SD大鼠70只，21日龄，体重50±10g，由温州医学院实验动物中心提供和饲养，许可证号：SYXK（浙）2005-0061。1.2药 物  丙酸睾酮注射液（规格：1mL/25mg，天津金耀氨基酸有限公司）；注射用绒促性素（规格：1000u/支，丽珠集团丽珠制药厂）；桂枝茯苓丸（规格：每100丸重10克，山西华康药业股份有限公司）；达英-35（规格：每片含醋酸环丙孕酮2mg和炔雌醇0.035mg，拜耳医药保健有限公司广州分公司）；益肾导痰调冲汤（由仙灵脾、菟丝子、杞子、胆南星、白芥子、法半夏、石菖蒲、水蛭、海藻、山慈菇、丹参、香附、茺蔚子等组成，规格：100ml/袋，每毫升所含生药量2.3g，由温州中山医院中国中西医结合学会生殖医学不孕不育研究所提供）；1.3试 剂  FSH、LH、T、E2放射免疫试剂盒购自上海史瑞可生物技术有限公司；瘦素ELLESA试剂盒、OB-R、IGF-IR免疫组化试剂盒及SABC二抗试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司。

二、实验方法

2.1  造模及分组  

70只SD大鼠随机分为病理模型组57只，正常对照组13只。病理模型组大鼠每天颈背部皮下注射HCG 5U，隔日注射丙酸睾丸酮1.25mg；正常对照组给予生理盐水0.05mL，给药第21天处死正常组大鼠3只和病理模型组大鼠7只评价造模效果。镜下观察正常对照组卵巢组织卵泡数目较少，并可见成熟卵泡和黄体。病理组卵巢组织内均可见多个细小卵泡和闭锁卵泡，无成熟卵泡，提示造模成功。其余60只再随机分为正常对照组、模型组、中药组、达英-35组、达英加中药组、桂枝茯苓丸组，每组10只。

2.2  给 药   

中药组给予等效剂量益肾导痰调冲汤23.96g/kg·d灌胃（按人鼠体重比换算相当于成人用药量的6.25倍），共14天；达英-35组给予等效剂量达英-35 0.21g/kg·d灌胃，共14天；达英加中药组给予益肾导痰调冲汤23.96g/kg·d＋达英-35 0.21g/kg·d灌胃（中西药灌胃间隔时间30min）共14天；桂枝茯苓丸组给予等效剂量桂枝茯苓丸0.42g/kg·d灌胃，共14天；正常对照组和模型组均给予同容积生理盐水，共14天。

2.3  标本采集  

大鼠处死前禁食水6h，测量大鼠体重，2％戊巴比妥钠50mg/kg腹腔注射麻醉，腹部剪毛，常规消毒，打开胸腹腔，心脏取血，3000r/min离心，分离血清，－20℃保存。

2.4  检测指标及方法  

血FSH、LH、E2、T采用放射免疫法测定；lep采用ELLESA法测定；精确切取双侧卵巢，4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，切片，采用免疫组化SABC法检测卵巢组织OB-R、IGF-IR表达。结果判断：显色呈棕黄色颗粒为阳性表达。正常对照组和模型组卵巢组织颗粒细胞及卵泡膜细胞均可见OB-R、IGF-IR阳性表达。

2.5  统计学方法  

使用SPSS11.5统计软件。所有数据进行正态性检验，用均数±标准差（±s）表示。多组样本均数比较进行方差齐性检验和单因素方差分析（one-way ANOVA）。方差齐性者两两比较采用LSD法，方差不齐者进行Dunnet,sT3检验。

三、实验结果

3.1  卵巢组织形态学改变  

正常对照组卵巢包膜厚薄均一，卵巢内可见窦状卵泡发育及成熟卵泡，个别可见排卵征。模型组卵巢色泽苍白，体积明显增大或缩小，卵巢表面呈明显多囊样改变，包膜明显增厚。卵巢内可见多个细小卵泡发育，未见成熟卵泡及排卵征。中药组、达英-35、达英加中药组、桂枝茯苓丸组大鼠卵巢较模型组色泽红润，体积偶有增大或缩小，卵巢表面偶有多囊样改变。闭锁卵泡数目明显较模型组减少。中药组、桂枝茯苓丸组卵巢内可见窦状卵泡及成熟卵泡，部分可见排卵征，中药组组较桂枝茯苓丸组好，接近于正常对照组。达英-35组、达英加中药组无成熟卵泡发育。

3.2  用药前后体重变化  

治疗前各模型组大鼠体重明显高于正常对照组（P<0.05）。治疗后，各实验组大鼠体重均有不同程度增加，中药组、达英-35、达英加中药组、桂枝茯苓丸组大鼠体重增长幅度明显小于模型组（P<0.05）；达英加中药组、中药组较达英-35、桂枝茯苓丸组增长幅度小（P<0.05）。

2.3  各组大鼠血清生殖激素   

与正常对照组比较，模型组LH、LH/FSH、T明显增高（P<0.01），FSH、E2明显降低（P<0.05）。与模型组比较，用药后各实验组LH、LH/FSH、T明显降低（P<0.05或P<0.01），E2增高（P<0.05或 P<0.01）。中药组、达英加中药组LH、LH/FSH、T、E2分别与达英-35、桂枝茯苓丸组比较，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；达英加中药组LH、LH/FSH、T、E2与中药组比较，差异有统计学意义（P<0.05），表1。

表1 各组大鼠生殖激素比较（±s）

注：与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，△p<0.05，△△p<0.01；与中药组比较，▲p<0.05

2.4  各组大鼠血清lep水平比较  

模型组大鼠血清lep水平明显高于正常对照组（P<0.01）；用药后， 中药组、达英-35、达英加中药组、桂枝茯苓丸组血清lep水平较模型组显著降低（P<0.05，P<0.01）；中药组、达英加中药组间，达英-35、桂枝茯苓丸组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05），表2。

2.5  卵巢组织OB-R、IGF-IR表达  

正常对照组大鼠卵巢颗粒细胞及卵泡膜细胞可见OB-R、IGF-IR表达；模型组OB-R、IGF-IR阳性表达较多，明显高于正常对照组（P<0.01）；用药后，中药组、达英-35+中药组OB-R、IGF-IR表达较少，明显低于模型组（P<0.01）；达英-35组、桂枝茯苓丸组亦低于模型组（P<0.05），但中药组、达英+中药组低于中药组和桂枝茯苓丸组（P<0.05），表2。

             表2  各组大鼠血清lep、OB-R、IGF-IR水平比较（±s）

注：与正常组比较，*P<0.01；与模型组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与达英-35组比较，▲P<0.05；与中药组比较，☆P<0.05

四、讨 论

  有研究表明[2]，PCOS存在内分泌、代谢障碍以及卵巢组织形态学及其功能异常。下丘脑－垂体－卵巢轴的功能紊乱是PCOS最主要的病理生理变化。lep调节下丘脑-垂体-卵巢轴的功能，和OB-R、IGF-IR一起在PCOS的发生发展中参与卵泡膜细胞和颗粒细胞的作用，促进卵泡膜细胞合成雄激素，形成PCOS高雄激素血症。鲁海鸥等[3]研究发现不同原因不孕症中血清lep水平最高的为卵巢功能障碍，推测lep主要通过影响PCOS患者的卵巢功能影响生殖。本研究发现，PCOS大鼠血清lep水平升高（P<0.01），模型组OB-R、IGF-IR阳性表达率明显增高（P<0.01）。表明lep和IGF-IR参与了PCOS的发生发展[4-6]。

  程泾教授认为，PCOS的致病机制主要是由于脾肾阳虚，痰湿瘀滞冲任所致。治疗以健脾益肾，化痰祛瘀调冲为基本原则，拟方益肾导痰调冲汤。方中仙灵脾、菟丝子、杞子补肾之力较强，菟丝子[7]水提取物能提高垂体对下丘脑促性腺激素的反应性，具有雌激素样作用，还能促进脂肪分解，对于PCOS肥胖、雄激素过高有一定疗效。三药联用取阴中求阳之意。胆南星、白芥子、法半夏、石菖蒲燥湿化痰，水蛭、海藻、山慈菇化瘀散结，丹参、香附、茺蔚子[8]活血化瘀调经。茺蔚子作为妇科引经药，可引导全方药物直达病所。各药合用，使肾充脾旺，痰瘀之邪尽除，阴平阳秘，气血冲任调和，则月经如期而至，易于摄精成孕。谈珍瑜等[9]研究表明，补肾活血中药可明显降低PCOS大鼠血清lep和T水平，并具有明显的减肥效应；提示补肾活血中药可阻碍PCOS患者肥胖的发展。本实验的研究结果与以上观点一致。

 本实验结果显示，益肾导痰调冲汤可改善PCOS大鼠的全身状况及卵巢的局部功能，降低PCOS大鼠血清LH/FSH比值，降低血清T及lep水平，增高E2水平，下调OB-R、IGF-IR表达，有助于卵泡的生长发育及优势卵泡的形成，改善PCOS大鼠的高雄激素血症及排卵障碍。

参考文献

[1]程泾.妇科疑难病现代中医诊断与治疗[M].北京:人民卫生出版社,2003:248.

[2] 王世阆.卵巢疾病[M].北京:人民卫生出版社,2004:.83-84.

[3] 鲁海鸥,阎素文, 张宁,张黎等.不孕症与血清瘦素水平关系的观察[J].人民军医,2002,45(11):660-661.

[4] Maliqueo M, Piwooka V, Perbz Bravo F, et al. Evalustion of acute effect of GnRH administration on leptin secretion in normal and hyperanddrogenic women[J]. Rev Med Chil, 2000,128 (5):460-466.

[5] Agarwal SK,Vogel K, Weitsman SR, et al. Leptin antagonizes the Insulin-like growth factor-I augmentation of sieroidogenesis in granμlose and theca cells of the human ovary[J]. J Clin Endocrinol Metab 1999,84(3):1072.

[6] Loffler S, Aust G, Kohler U, et al. Evidence of leptin expresstion in nomal polycystic human ovaries[J]. Mol Hum Repord, 2001, 7(12):1143-1149.

[7] 程泾.妇科疑难病现代中医诊断与治疗[M].北京:人民卫生出版社,2003:118.

[8]雷载权.中药学[M].上海：上海科学技术出版社,1995:84-310.

[9]谈珍瑜,邹芝香,尤昭玲,等.补肾活血方对PCO大鼠瘦素、胰岛素和睾酮影响的实验研究[J].新中医,2006,38(12):87-88.